Qué es un cromatograma
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) separa los componentes de una muestra y los va detectando uno por uno a medida que salen de la columna. El registro de esa salida es el cromatograma: una línea con picos. Si la espectrometría de masas respondía "¿qué es?", el cromatograma responde "¿qué tan puro está?".
Los dos ejes
El eje horizontal es el tiempo: cuánto tarda cada componente en salir de la columna. El eje vertical es la señal del detector: cuánto hay de lo que está saliendo en ese instante. Una muestra perfectamente pura daría, idealmente, un solo pico; en la práctica aparecen algunos más, pequeños, que son las impurezas.
Los picos y el tiempo de retención
Cada pico es un componente. El más alto y ancho suele ser el péptido que buscas; los menores, subproductos de la síntesis. La posición de un pico en el eje del tiempo es su tiempo de retención, y funciona como una huella: en condiciones de análisis fijas, el compuesto sale siempre alrededor del mismo momento, lo que ayuda a reconocerlo.
El área es la pureza
La pureza cromatográfica se calcula a partir del área integrada de los picos. La pureza es el porcentaje del área total que ocupa el pico principal. Por eso cuando lees pureza ≥99% (HPLC), significa que el pico del compuesto representa el 99% o más del área detectada, y todo lo demás, los picos pequeños, suma el 1% restante [1].
Un cromatograma limpio es un pico que domina y casi nada alrededor. Ese "casi nada" es lo que el número de pureza pone en cifras.
Qué mirar en la práctica
- Que haya un pico claramente dominante: el producto.
- Que los picos pequeños sean pequeños y pocos: las impurezas.
- Que la pureza por área cumpla el valor indicado para ese compuesto (≥99%).
El perfil de impurezas depende de las condiciones del análisis. Para interpretar la pureza, se revisan conjuntamente el método, la integración y el perfil de picos [2]. El cromatograma es la pureza; la espectrometría de masas es la identidad; y cómo se juntan ambas en el certificado está en la guía de cómo leer un COA.