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§ Glosario · Calidad, análisis y uso

Tiempo de retención en HPLC

El tiempo de retención es el tiempo que pasa desde que la muestra entra en la columna hasta que el detector registra el máximo del pico de una sustancia. En la HPLC de fase reversa, los péptidos con más zonas hidrofóbicas interactúan más con la fase estacionaria y salen después 1.

De qué depende el tiempo de retención

Cambia con la columna, la temperatura, el flujo y la composición de la fase móvil; en un gradiente, también con la velocidad a la que sube la proporción de disolvente orgánico 1. Por eso un tiempo de retención solo se compara dentro del mismo método.

La secuencia también lo mueve. Dos residuos con la misma masa, como un aminoácido y su forma D, pueden separarse en la columna, y esa separación frente a una referencia es una de las pocas maneras de confirmar la configuración de residuos como los de la ipamorelina.

El tiempo de retención como apoyo de la identidad

Comparar el tiempo de retención de la muestra con el de un estándar de referencia en el mismo método apoya la identidad del péptido; la masa exacta por LC-MS la confirma.

Fichas donde aparece Tiempo de retención

Referencias

  1. Aguilar MI. Reversed-phase high-performance liquid chromatography. Methods in Molecular Biology, 2004;251:9–22. PMID 14704435. Fuente
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