§ Glosario · Calidad, análisis y uso
Fase móvil y fase estacionaria
La fase móvil y la fase estacionaria son las dos partes de toda cromatografía: la estacionaria queda fija dentro de la columna y la móvil fluye a través de ella arrastrando la muestra. En la HPLC de fase reversa de péptidos, la fase estacionaria es hidrofóbica, por lo general cadenas alquílicas unidas a sílice, y la móvil es agua con un disolvente orgánico como el acetonitrilo 1.
Fase móvil y fase estacionaria en la HPLC de fase reversa
Las columnas de fase reversa más usadas llevan cadenas de 18 u 8 carbonos (C18 o C8) sobre partículas de sílice. Un péptido se retiene por las zonas hidrofóbicas de su secuencia y sale cuando la fase móvil se vuelve lo bastante orgánica para desprenderlo 1.
La fase móvil: el gradiente y el TFA
La separación se hace con un gradiente: la proporción de acetonitrilo sube con el tiempo y cada péptido sale en su momento. El ácido trifluoroacético se añade a la fase móvil, y por eso los péptidos purificados por HPLC suelen quedar como sal de TFA 2.
Referencias
- Aguilar MI. Reversed-phase high-performance liquid chromatography. Methods in Molecular Biology, 2004;251:9–22. PMID 14704435. Fuente
- Cornish J, et al. Trifluoroacetate, a contaminant in purified proteins, inhibits proliferation of osteoblasts and chondrocytes. American Journal of Physiology, 1999;277(5):E779–E783. PMID 10567002. Fuente
RUOTodos los productos son exclusivamente para protocolos de investigación en laboratorio (RUO) y no son aptos para consumo humano ni animal. Volver al glosario.
